次氯酸鈣金黃色pu萄球菌滅活效果檢測技術規範與方法優化研（yán）究

次氯酸鈣金黃色pu萄球菌滅（miè）活效（xiào）果檢測技術規範與方法優化研究  

一、檢測原理與標準依據  

（一）殺菌機製  

次氯酸鈣溶於水（shuǐ）釋（shì）放次氯酸（HClO），通過以下途徑殺滅金黃色pu萄球菌（StaphylococcusaureusATCC6538）：  

1.細胞膜破壞：HClO穿透細胞壁，氧化磷脂雙分子層；  

2.蛋（dàn）白質變（biàn）性：與酶活性中心巰基（-SH）反（fǎn）應，抑（yì）製代（dài）謝酶活性；  

3.DNA損傷：破壞核酸結構，阻止細胞（bāo）複製1。  

（二（èr））標準方法  

國標：GB/T27954-2020《消毒劑衛生要求》懸液定量殺滅試驗；  

國際標（biāo）準：EN13704《化（huà）學消毒劑和防腐劑食品、工業、家（jiā）庭和公（gōng）共區域用化學消毒劑殺菌活性評（píng）價》2。  

二、試驗材料與試劑配製  

（一）菌株與培養基  

1.標準菌株：金（jīn）黃色pu萄球菌ATCC6538，由中國普通微生物菌種保藏中心提供；  

2.培養基（jī）：營養瓊（qióng）脂（zhī）（NA），pH7.0±0.2，121℃滅菌20分鍾1。  

（二）關鍵試劑  

1. 次氯酸鈣溶液：  

母液（yè）：稱取（qǔ）0.5g次氯（lǜ）酸鈣（有效氯65%），用無菌（jun1）水溶解定容至100mL，有效氯濃度3250mg/L；  

工作液：用PBS稀釋至500mg/L（按殺滅要求調整）3。    

中和劑：  

0.1%硫代liu酸鈉（nà）（Na₂S₂O₃）溶液，中和有效氯至＜0.1mg/L1。  

三、試驗流程與操作規範  

（一）菌懸液製（zhì）備  

1.活化培養：  

將凍幹菌種接種至NA斜麵，37℃培養18-24小（xiǎo）時；  

挑取單（dān）菌落轉接至營養肉（ròu）湯，37℃振蕩培養6小時（shí）（對數生長期）。   

稀釋與幹擾物添加：  

用0.03mol/LPBS（含10%小牛血清）稀釋菌液至1×10⁸CFU/mL；  

混勻後備用，2小時內使用2。  

（二）殺滅試驗步驟  

樣品處理：  

取5mL次氯酸（suān）鈣工（gōng）作液（500mg/L）至滅菌試管，37℃水浴預熱5分鍾；  

加入（rù）5mL菌懸液（1×10⁸CFU/mL），立即（jí）計時並混勻。    

作用與終（zhōng）止：  

20℃±1℃避光作用10分（fèn）鍾（按產品說（shuō）明書調整（zhěng）作用時間）；  

取1.0mL混合液至（zhì）9.0mL中和劑，混勻後（hòu）靜置10分鍾1。   

培養與計數：    

取中和後液體1.0mL，用PBS梯度稀釋（10⁻¹-10⁻³）；  

各稀釋度取0.5mL傾（qīng）注NA平板，37℃培養48小時，計數菌落數（CFU）2。  

（三）對照組設置  

對照組（zǔ）類型操作步驟作用  

陽性對照組菌懸液+PBS（不加消（xiāo）毒劑（jì））驗證菌活性  

陰性對照（zhào）組中和（hé）劑+培養基（jī）驗證（zhèng）無菌操作  

中和劑對照組消毒劑+中和劑+菌懸（xuán）液驗證中和（hé）劑有效性  

四、結果計（jì）算與判定標準  

（一）殺滅率計算  

殺滅率（）  

符號說明：  

試驗組活菌數（CFU/mL）；  

陽性對照組活菌數（CFU/mL）1。  

（二）判定標準  

產品（pǐn）類型作用（yòng）時間（min）有效氯濃度（mg/L）殺滅率要求（%）  

物體表麵消毒劑10500≥99.99  

手消毒劑（jì）1.51000≥99.999  

五、影響因素與優化策略  

（一）關鍵因素控（kòng）製  

因素優化條件效果（guǒ）  

有效氯（lǜ）濃度（dù）500-1000mg/L（根據有機物調整）殺滅率提升至99.99%  

作用pH6.5-7.5（中性條（tiáo）件）HClO占比達80%以上  

溫度20-25℃溫度（dù）每升高（gāo）10℃，殺滅時間縮短一半  

（二）常見問題解決方案  

問題現象原（yuán）因分析解決措施  

殺滅率（lǜ）偏低有（yǒu）效氯濃度不足或中和劑過量（liàng）重新標定濃度，調整中和劑用量至9mL  

菌（jun1）落蔓延（yán）菌（jun1）懸液濃度過高增加（jiā）稀釋梯度至10⁻⁴  

中和劑失效（xiào）硫代（dài）liu酸鈉氧化使用新鮮配製的中和（hé）劑  

六、質（zhì）量控製與應用場（chǎng）景  

（一）質控指標  

1.菌懸液（yè）濃度：1×10⁸±0.5×10⁸CFU/mL；  

2.中和劑有效性：中和後殘留菌（jun1）數≤10CFU/mL2。  

（二）典型應用  

1.醫療環境表麵：物體表（biǎo）麵擦拭後殺滅率≥99.99%；  

2.食品加工設備：消毒後金黃色pu萄球菌殘留≤10CFU/cm²1。  

關鍵詞：次氯酸鈣；金黃色pu萄球菌；殺滅率；懸液定量試驗；GB/T27954  

參考文獻  

[1]GB/T27954-2020消毒劑衛生要求[S].  

[2]EN13704化學消毒劑殺菌（jun1）活性評價[S].  

[3]WHO飲用水消毒指南[S].